· ポリアクリルアミドゲルはアクリルアミドモノマー、重合開始物質、触媒、および適切な塩と緩衝液の混合物から作られます。
· アクリルアミドBIS（N、N'-メチレンダブルアクリルアミド）はモノマー形態のゲルマトリックスです。
・過硫酸アンモニウムは接着剤の重合反応を開始します。接着剤の配合には、水で調製した10%過硫酸アンモニウム溶液が必要です。多くの情報では、活性使用の必要性が示唆されていますが、10%溶液は4℃で数週間置いても活性が著しく低下することはありません。10mlまで調製し、接着剤が凝集しなかった場合は廃棄してください。
ヒント:アクリルアミドシーケンシング用接着剤とタンパク質用接着剤は同じではありません。既製のアクリルアミド：BIS溶液を使用する場合は、適切なボトルを必ず入手してください。
· TEMED（N, N, N', N'-テトラメチルエチレンジアミン）は触媒です。茶色の瓶に入れて冷蔵庫で保管してください。接着剤を注ぐ直前に加えてください。
· ポリアクリルアミド電気泳動法で使用したガラスは、毎回の泳動前後に洗浄する必要があります。泳動後は、柔らかいブラシと布で温かい石鹸水で洗浄し、蒸留水ですすぎ、乾燥させてください。
· 中空ポリマーは湿気やほこりによって損傷を受ける可能性があります。電気泳動の前に、ガラスプレートをガラスクリーナーで洗浄後、柔らかいブラシで拭いてください。蒸留水で洗い、ペーパータオルで完全に乾かしてください。ペーパータオルで拭く前に70%エタノールでリンスすると、より清潔になり、乾燥も早まります。アクリルアミドのサンプルを、BIS、水、緩衝液、過硫酸アンモニウム、TEMEDの順に添加してください。よく振ってからすぐに注ぎ入れてください。
ポリアクリルアミドは重合前に脱気する必要はありません。（以前は、酸素が重合を阻害するため、アクリルアミドを真空状態にして気泡を除去していました。）
水平接着ポイントのサンプルチップ。
· 下のボックスに黒い紙を置き、背景を黒にしてサンプルの穴をいくつか開けると、よりはっきりと見えます。
· コロイドのちょうど上に、接着剤タンクにバッファーを満たします。
· 端にライトが付いている場合は、ライトを点灯し、コロイドに光を当てます。サンプルをピペットに吸い込みます。
· 自動ピペッティング装置を使用する。
10～200μlの液体移動ポイントは、サンプル上のほとんどのポイントで使用できます。非常に小さなサンプル孔（10μl未満）の場合は、シーケンシンググルー用のロングピペットヘッドの方が便利です。
· サンプルに浸した状態でピペッティングを行うと、ゆっくりと移動する液体を吸い込むことになります。サンプルはグリセリンで粘り気を帯びる場合があり、急激なポンピングによりピペットヘッドに気泡が入り込む可能性があります。
・サンプルを吸い込んだ後、ピペッティングヘッドをパイプの端や拭き取り紙などで軽く動かし、液滴の外側の液滴を吸い込みます。サンプルを吸い込まないように注意してください。
サンプルをサンプルホールに入れる
· ピペッティング装置はわずかに圧力を保ち、サンプルをわずかに動かしてオーバーフロー液のヘッドを作ります。
ピペッティングヘッドをバッファに挿入し、スポット穴よりわずかに高い位置で正圧を維持します。ピペットの先端は小さな穴に挿入できます。
・サンプルをゆっくりと確実に排出します。ピペットのチップをサンプル穴の上に置き、サンプルが穴に沈んでいきます。押し込むのではなく、サンプルが穴に溜まるまで沈んでいくようにしてください。
· 最後の一滴のサンプルが液体ヘッドに落ちると、液体は2番目の脚に移動し、ゆっくりと液体の動きを上げてバッファから移動します。
垂直方向の接着剤サンプル採取はどのように行うのですか?
・2枚のガラス板の間に垂直の接着ポイントサンプル穴があいています。接着剤が非常に薄い場合、ピペットヘッドを2枚のガラス板の間に挿入することすらできません。グリセリンにご注意ください！ピペットヘッドをサンプル穴にかざすと、サンプルが穴の中に沈んでいきます。
・ポイントサンプルを採取する前に、ポリプロピレンアシルゲルのサンプルホールの垂直ポイントを必ずきれいにすすいでください。未重合のアクリルアミドとサンプルホールの底に溜まった水分を洗い流してください。水分によってサンプルホールが著しく狭くなる可能性があります。25mlまたは50mlのシリンジと18ゲージの針を使用してください。電気泳動バッファーを注ぎ、サンプルホールを丁寧に洗い流してください。
· サンプルの穴が見えにくい場合がありますが、残りの作業は簡単です。穴が多すぎる場合は、サンプルバッファーをブロモフェノールブルーで検査することができます。
投稿日時: 2023年3月31日