· ポリアクリルアミドゲルは、アクリルアミドモノマー、重合開始物質、触媒、および塩と緩衝液の混合物を一緒にする必要があります。
· アクリルアミドBIS (N,N'-メチレンダブルアクリルアミド) はゲルマトリックスのモノマーです。
· 過硫酸アンモニウムは接着重合プロセスを開始します。接着剤の配合には、水で調製した 10% 過硫酸アンモニウム溶液が必要です。情報のほとんどは積極的な使用の必要性を示していました。ただし、10% 溶液は 4℃ に数週間放置しても活性が大幅に低下することはありません。10mlまで作り、接着剤が凝集しなくなったら捨てます。
ヒント: の割合アクリルアミドシーケンスにおける接着剤とタンパク質接着剤は同じではありません。既製のアクリルアミド: BIS 溶液を使用する場合は、必ず適切なボトルを入手してください。
· TEMED (N, N, N', N'-テトラメチル エチレンジアミン) は触媒であり、茶色のボトルに入っており、冷蔵庫に置かれています。接着剤を注ぐ直前に加えます。
・ポリアクリルアミド電気泳動で使用したガラスは、電気泳動の前後に毎回洗浄してください。電気泳動後、熱い石鹸水で柔らかいブラシと布で洗い、蒸留水ですすぎ、乾燥させてください。
・中空ポリマーは湿気やホコリの原因となります。電気泳動の前に、ガラスプレートをガラスクリーナーで洗浄し、柔らかいブラシで拭きます。蒸留水で洗い、紙拭きで完全に乾燥させます。紙で拭く前に 70% エタノールですすぐと、汚れがきれいになり、乾燥が早くなります。アクリルアミドのサンプルを連続的に加えます:BIS、水、緩衝液、過硫酸アンモニウム、TEMED。よく振ってすぐに注ぎます。
重合前にポリアクリルアミドを脱気する必要はありません。(アクリルアミドは酸素が重合を阻害するため、気泡を除去するために真空中に置かれていました。)
水平接着ポイントのサンプルチップ。
· 下のボックスに黒い紙を入れ、背景を黒にしてサンプル穴を作り、よりはっきりと見えるようにします。
· 接着剤タンクに満たされたバッファー、コロイドのすぐ上。
· エッジにライトがある場合は、ライトをオンにして、光がコロイドを輝かせます。サンプルをピペットに吸い込みます。
・自動ピペッティング装置を使用する。
・10～200μmの1液移動点でサンプル上のほとんどの点で使用可能。非常に小さなサンプルホール (10μl 未満) の場合は、接着剤のシーケンスに使用する長いピペットヘッドの方が便利です。
· サンプルに浸したままピペッティングし、ゆっくりと動く液体を吸い込みます。サンプルはグリセリンでベタベタしているように見える場合があり、急速にポンピングするとピペット ヘッドに気泡が引き込まれる可能性があります。
· サンプルをピペッティング ヘッドに吸い込んだ後、液体ヘッドをパイプの端にそっと移動させるか、ワイピング ペーパーで液滴の外側の液体ヘッドを吸い込みます。サンプルを吸い込まないよう注意してください。
サンプルをサンプル穴に置きます
· ピペッティング装置は、わずかな圧力を維持し、サンプルをわずかに移動させて液体ヘッドをオーバーフローさせます。
· スポットホールよりわずかに高い位置でバッファーに挿入されたピペッティングヘッドは、正圧を維持します。ピペットの先端を小さな穴に挿入できます。
・ゆっくりと着実にサンプルを取り出します。ピペットチップをポイントサンプル穴の上に置くと、サンプルが穴に沈みます。サンプルを押し込むのではなく、サンプルの穴を埋めるようにサンプルを沈めます。
· 液体ヘッドでサンプルの最後の一滴が落ちたら、液体は 2 番目の脚に移動し、ゆっくりと液体を上昇させてバッファーの外に移動します。
垂直接着剤サンプリングを行うにはどうすればよいですか?
・2枚のガラスの間に垂直の接着点サンプル穴が形成されています。非常に薄い接着剤では、ピペット ヘッドを 2 枚のガラス板の間に挿入することさえできません。グリセリンに注目！ピペットヘッドをサンプル穴の上に置くと、サンプルが穴に沈みます。
・サンプルを採取する前に、必ずサンプル穴をきれいにすすいだポリプロピレンアシルゲルサンプルの先端を垂直に置きます。サンプル穴の底に現れる未重合のアクリルアミドや水を洗い流します。水によりサンプル穴が大幅に小さくなる可能性があります。25ml または 50ml の注射器と 18 ゲージの針を使用します。電気泳動バッファーを注ぎ、サンプル穴を注意深く洗い流します。
· サンプル穴が見にくい場合がありますが、同時に残りは簡単です。過剰な穴がある場合は、サンプルバッファーをブロモフェノールブルーでテストできます。
投稿時刻: 2023 年 3 月 31 日